Иммунофлуоресцентный анализ (МФА)

Имму­но­ло­ги­че­ские интерференции

Любой имму­но­ло­ги­че­ский метод уяз­вим для интер­фе­рен­ций. Гете­ро­филь­ные анти­те­ла, анти­жи­вот­ные анти­те­ла чело­ве­ка, ауто­ан­ти­те­ла, рев­ма­то­ид­ный фак­тор, липе­мия, пере­крёст­ная реак­тив­ность и мат­рич­ные осо­бен­но­сти образ­ца могут изме­нять свя­зы­ва­ние анти­тел и при­во­дить как к лож­но высо­ким, так и к лож­но низ­ким резуль­та­там. Это осо­бен­но важ­но в пор­та­тив­ном фор­ма­те, где иссле­до­ва­ние выпол­ня­ет не лабо­ра­тор­ный спе­ци­а­лист, а кли­ни­че­ский пер­со­нал, часто в усло­ви­ях дефи­ци­та времени.

Отдель­ное зна­че­ние име­ет био­ти­но­вая интер­фе­рен­ция. Рост при­ме­не­ния высо­ких доз био­ти­на тре­бу­ет насто­ро­жен­но­сти кли­ни­ци­стов и лабо­ра­то­рий, посколь­ку био­тин может иска­жать резуль­та­ты био­тин-стреп­та­ви­ди­но­вых имму­но­ло­ги­че­ских тестов. FDA пре­ду­пре­жда­ет о рис­ке био­ти­но­вой интер­фе­рен­ции, осо­бен­но для тро­по­ни­но­вых тестов, где лож­но низ­кий резуль­тат спо­со­бен при­ве­сти к про­пус­ку инфарк­та миокарда.

Эффект высо­ких доз

Для «сэндвич»-иммуноанализов харак­те­рен эффект высо­ких доз: при крайне высо­кой кон­цен­тра­ции ана­ли­та избы­ток анти­ге­на может нару­шать обра­зо­ва­ние пол­но­цен­но­го «антитело—антиген—антитело» ком­плек­са и при­во­дить к пара­док­саль­но низ­ко­му сиг­на­лу. В пуб­ли­ка­ци­ях по имму­но­хро­ма­то­гра­фи­че­ским ана­ли­зам тако­го типа пока­за­но, что подоб­ные систе­мы могут давать лож­но низ­кие резуль­та­ты при очень высо­ких кон­цен­тра­ци­ях аналита.

Прак­ти­че­ский вывод: если резуль­тат не соот­вет­ству­ет кли­ни­че­ской кар­тине, тре­бу­ют­ся повтор­ное иссле­до­ва­ние, раз­ве­де­ние образ­ца или кон­суль­та­ция лабо­ра­тор­но­го специалиста.

Пре­а­на­ли­ти­че­ский этап как наи­бо­лее уяз­ви­мое звено

В цен­тра­ли­зо­ван­ной лабо­ра­то­рии зна­чи­тель­ная часть оши­бок предот­вра­ща­ет­ся стан­дар­ти­зи­ро­ван­ным взя­ти­ем кро­ви, кон­тро­лем типа про­бир­ки, цен­три­фу­ги­ро­ва­ни­ем, оцен­кой гемо­ли­за, липе­мии и икте­рич­но­сти, реги­стра­ци­ей образ­ца и авто­ма­ти­че­ской пере­да­чей дан­ных. В пор­та­тив­ном иссле­до­ва­нии всё это частич­но пере­но­сит­ся к посте­ли паци­ен­та или в амбу­ла­тор­ный кабинет.

Неточ­но­сти могут воз­ни­кать при недо­ста­точ­ном объ­ё­ме образ­ца, непра­виль­ном типе мате­ри­а­ла, загряз­не­нии капил­ляр­ной кро­ви тка­не­вой жид­ко­стью, пло­хом пере­ме­ши­ва­нии с анти­ко­а­гу­лян­том, нали­чии мик­рос­густ­ков, нару­ше­нии вре­ме­ни нане­се­ния образ­ца, несо­блю­де­нии тем­пе­ра­ту­ры хра­не­ния кас­сет, исполь­зо­ва­нии про­сро­чен­ных реа­ген­тов или непра­виль­ной иден­ти­фи­ка­ции пациента.

Нель­зя пере­но­сить лабо­ра­тор­ные алго­рит­мы на любой пор­та­тив­ный тест

Наи­бо­лее пока­за­те­лен при­мер сер­деч­ных тро­по­ни­нов. Реко­мен­да­ции ESC по остро­му коро­нар­но­му син­дро­му отда­ют пред­по­чте­ние высо­ко­чув­стви­тель­ным тро­по­ни­но­вым тестам; быст­рые алго­рит­мы 0/1 ч и 0/2 ч осно­ва­ны на серий­ных изме­ре­ни­ях высо­ко­чув­стви­тель­но­го сер­деч­но­го тро­по­ни­на, при­чём поро­ги зави­сят от кон­крет­но­го мето­да. В этих же реко­мен­да­ци­ях под­чёрк­ну­то, что боль­шин­ство исполь­зу­е­мых пор­та­тив­ных тро­по­ни­но­вых тестов не отно­сят­ся к высо­ко­чув­стви­тель­ным; их пре­иму­ще­ство — более корот­кое вре­мя полу­че­ния резуль­та­та, но это урав­но­ве­ши­ва­ет­ся мень­шей чув­стви­тель­но­стью, мень­шей диа­гно­сти­че­ской точ­но­стью и мень­шей отри­ца­тель­ной про­гно­сти­че­ской ценностью.

Сле­до­ва­тель­но, пор­та­тив­ный тро­по­нин нель­зя авто­ма­ти­че­ски вклю­чать в алго­рит­мы, раз­ра­бо­тан­ные для цен­траль­ных высо­ко­чув­стви­тель­ных плат­форм, если кон­крет­ный тест не про­шёл соот­вет­ству­ю­щую кли­ни­че­скую валидацию.